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一種從熱帶木本植物中無(wú)毒組織研磨提取核酸的方法

  發(fā)布時(shí)間:2019/12/19 點(diǎn)擊量:4087

    木本熱帶植物中含有大量復(fù)雜的有機(jī)化合物,這些有機(jī)化合物會(huì)抑制提取RNA或DNA所需的化學(xué)程序,從而不利于后續(xù)研究及應(yīng)用,如RNA測(cè)序和基因表達(dá)分析。為了克服這個(gè)問(wèn)題,研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案,而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是,這種提取方式耗時(shí)長(zhǎng)、需使用有毒化學(xué)品(例如苯酚和CHCl3),并且一次只能處理少量樣品。為了克服這些問(wèn)題,我們開(kāi)發(fā)了一種基于CTAB / PVP的新方法,用于RNA或DNA提取,去掉了傳統(tǒng)方法中的苯酚/CHCl3步驟。此外,該方法同樣適用于96孔深孔板,使用SPEX高通量組織研磨儀,一次研磨6塊深孔板,同時(shí)處理576個(gè)樣品,大大加快了處理速度。

 

    我們的新方法,能夠從夏威夷果、牛油果和芒果組織中,成功提取RNA,這些組織使用傳統(tǒng)方法很難提取到RNA。而后我們還驗(yàn)證了,該方法提取的RNA成功地合成cDNA,以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR并生成高質(zhì)量的RNA-Seq庫(kù)。該方法經(jīng)輕微改動(dòng)后,可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹(shù)種中快速提取DNA。

 

    這種方法可以更安全、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA,從而為將來(lái)在熱帶樹(shù)木上的研究提供了便利。

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